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凱氏定氮法測量飼料中的氨氮含量
氨態氮(NH3N)以游離氨(NH3)或銨鹽(NH4+)形式存在于青貯飼料中,兩者的組成比例取決于青貯飼料的pH值,當pH值偏高時以游離態形式存在,反之,以銨鹽形式存在。青貯飼料保存完好的條件就是pH值在4. 2以下。良好品質的青貯飼料中氨態氮以銨鹽形式存在,但是當青貯飼料腐敗嚴重時,會聞到刺鼻的氨味。青貯飼料中的氨態氮主要是含氮有機物受植物酶和好氣性細菌作用的分解產物,因此氨態氮的含量可以作為青貯飼料中蛋白質分解程度的指標。實驗室中常用氨態氮占總氮的比例來反映青貯飼料的發酵品質。目前,用于檢測青貯飼料中氨態氮的方法主有分光光度法和堿蒸餾滴定法。分光光度法在氨態氮的分析中用途廣泛,但是由于試劑毒性大及提取液中鈣、鎂和鐵等金屬離子、硫化物、醛和酮類、顏色等均干擾測定,需要作相應的預處理。常規的半微量堿蒸餾法也是一種常用的方法,但是由于操作較為繁瑣,測定時間也比較長,不太適合大批樣品分析。本研究旨在探討用自動凱氏定氮儀測定青貯飼料中的氨態氮的方法,以適應青貯飼料科學研究和質量控制對簡便、快速、準確和大批量樣品檢測的需要。
1 實驗原理
凱氏定氮法主要用來測定樣品中有機氮含量,原理是樣品在催化劑作用下,用濃硫酸進行消化,使其中的蛋白質和其它有機氮轉化為NH4+,并與硫酸生成(NH4)2SO4。消化液在濃堿作用下進行蒸餾,釋放出氨,用硼酸溶液吸收并與之結合生成四硼酸銨,再用鹽酸滴定計算。
青貯飼料中氨態氮主要以銨鹽形式存在,銨鹽與較氨強的堿在共同加熱的條件下蒸餾出氨。本研究利用自動凱氏定氮儀測定青貯飼料中氨態氮,原理是銨鹽易溶于水,實驗中樣品不用消化直接加水制備提取液,加入氧化鎂,氧化鎂與水緩慢生成微溶的氫氧化鎂,然后加熱蒸餾出氨,自動吸收、滴定和計算。
2 分析
2.1 儀器操作參數條件的選擇本方法與半微量定氮原理相同,都是利用在堿性條件下蒸出提取液中氨及銨鹽。考慮到青貯飼料浸提液本身pH值較低(4. 0左右),應選擇適宜加水量。在提取液及氧化鎂不變的前提下,不同加水量對氨態氮測定結果的影響見表1。
結果表明,加水量的多少對檢測結果沒有顯著影響,測定時加水量選擇為50 ml。
表1 不同加水量對青貯飼料中氨態氮測定結果的影響
2.2 實驗操作的影響實驗中發現,提取液加入氧化鎂后應立即測定,否則測定結果會因提取液中銨鹽轉化為氨揮發而偏低。
2.3 加標回收實驗青貯飼料中氨態氮是植物原料中蛋白質在腐敗過程中分解產生的氨及銨鹽等堿性含氮物,所以本實驗將硫酸銨作為檢驗蒸餾器回收率的標準試劑進行加標回收實驗,回收率在99. 8% ~104. 3%之間,符合檢測要求(見表2)。
表2 樣品加標回收率測定
2.4 精密度實驗精密度實驗選取不同的青貯飼料鮮樣,分別平行測定6次,測定結果的相對標準偏差分別為1. 39%和0. 50% (見表3),儀器測定方法的精密度滿足分析要求。
表3 精密度測定
2.5 不同方法的比較對同一樣品,分別采用本方法與手動半微量堿蒸餾法測定NH3N含量。結果表明,兩種方法測定結果無顯著性差異(見表4)。
表4 不同方法測定氨態氮結果比較
3 討論
(1)實驗表明,全自動凱氏定氮儀法與手動半微量堿蒸餾法,經雙樣本平均值t檢驗分析,無顯著性差異(P>0. 05)。由于自動凱氏定氮法具有操作簡單、分析速度快、自動化程度高的優點,適合大批量樣品的測定。經過多次平行測定以及加標回收實驗,結果表明自動凱氏定氮儀法精確度高、重復性好、回收率高。
(2)提取液的制備受樣品剪碎均勻程度以及振蕩時間的影響,因此要盡可能切碎,而且要振搖充分,以減少提取損失。
(3)本實驗采用去離子水代替重蒸水,實驗數據表明可以滿足檢測的準確度與精密度,可減少實驗用水和能耗,具有現實意義。
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